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    WEPRO7240 Core Kit (CFS-C7)

    廠家:天根生化科技(北京)有限公司
      目錄號 規 格 價 格
    CFS-C7G 226 μl×96 rxn/ 1.2 ml×20 rxn/ 6 ml×4 rxn 28000元
    CFS-C7H 226 μl×96 rxn/ 1.2 ml×20 rxn/ 6 ml×4 rxn 28000元
    CFS-C7 226 μl×96 rxn/ 1.2 ml×20 rxn/ 6 ml×4 rxn 26000元
    產品簡介:

    本系列試劑盒能夠通過質粒模板實現蛋白的大量表達。本系列試劑盒采用轉錄和翻譯非偶聯的方法,試劑盒中提供SP6 RNA聚合酶,NTPRNase Inhibitor以及Transcription Buffer LM,加入模板后先完成DNA的轉錄,再配合麥胚無細胞蛋白表達系統預混mix完成mRNA的翻譯,該mix中包含蛋白翻譯的所有必需酶類、各種tRNA和離子,從而獲取目的蛋白。本系列試劑盒可選擇小、中、大三種表達規模,利用雙層液相反應法(Bilayer)表達目的蛋白,小規模反應蛋白表達純化后可達500 μg左右,大規模表達可達4 mg,非常適合western blotCBB染色等蛋白檢測實驗和蛋白結構解析以及免疫共沉淀、酶功能檢測、抗體檢測等常見蛋白質功能解析。特別地,本系列試劑盒還支持多個質粒模板在一個體系中同時表達,并且可以在表達之后正確模擬體內的蛋白復合體自組裝。此外,本系列中的C7HC7G試劑盒專門為表達His標簽蛋白和GST標簽蛋白做特殊優化,使得純化后的蛋白純度更高。


    產品特點:

    操作簡單:采用Bilayer 反應方法,不需要特殊儀器,只需加入模板即可進行反應

    體系靈活:可以根據后續應用自由選擇小、中、大三種不同的表達規模

    功能模擬:可以同時表達多個蛋白,并且表達之后的蛋白可以正確模擬體內相互結合的情況

    表達高效:一天內完成蛋白表達,蛋白表達量可達0.5-4 mg

    適用面廣:特別針對His標簽蛋白或GST標簽蛋白的表達進行特殊優化,提高純度


    保存條件

    低于-70保存,避免長期存放于干冰環境,反復凍融不超過2次。


    實驗例


    建議使用質粒模板進行蛋白表達。可以使用pEU系列質粒作為表達載體,將帶有起始密碼子和終止密碼子的cDNA克隆至載體上,提取質粒后直接用于蛋白表達。亦可使用其他帶有SP6啟動子的表達載體進行蛋白表達,不要使用T7啟動子。



    蛋白翻譯采用雙層液相反應法(Bilayer Reaction Method),通過反應液和麥胚裂解物造成的密度差,相互滲透,在液面相交處發生反應。隨著時間的推進,溶液逐漸由兩相變為單一的混合物而終止。



    使用WEPRO 7240G/H試劑盒分別小規模表達多個GST標簽蛋白和His標簽蛋白,用考馬斯亮藍(CBB)染色檢測(PAGE圖)蛋白表達量,并用對應方法純化后,檢測蛋白得率和純度。結果顯示,WEPRO 7240G/H表達蛋白成功率高,純化后蛋白得率可達300-600 μg,純度高,適合下游各類蛋白結構和功能研究。




    HIV的病毒感染因子(Viral Infectivity FactorVIF)可以與宿主細胞的細胞因子共同組成E3泛素連接酶復合物,通過降解宿主蛋白入侵宿主細胞。復合物由Rbx1ElonginBElonginCSOCS1Cullin2五個蛋白構成。將前四個蛋白的質粒和GST-tagged Cullin2質粒用WEPRO 7240在一個體系內同時表達,GSH純化后使用CBB染色檢測。結果顯示,5個蛋白均成功表達,并且經GSH純化后,5個蛋白均可成功標記,證明5個蛋白在分別表達成功后,在體系內結合形成了復合體。WEPRO 7240不但可以成功同時表達多個蛋白,并且可以保持蛋白的結構和功能,在in vitro體系中正確模擬in vivo蛋白復合體的組裝。

    地址:北京市海淀區西小口路66號東升科技園(北領地)C7-3 電話:800-990-6057
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